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向海雁鵝為向海鴻雁（Anser cygnoides）與籽鵝（Semen anserinum）雜交的物種。本文以向海雁鵝血為原料，對其多肽進行提取、分離、純化并分析其成分；基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接技術(shù)對其抗肺癌作用機制進行分析；并考察其抑制肺癌細胞的活性。研究內(nèi)容如下：以新鮮向海雁鵝血為原料，水解度為指標，篩選工具酶；采用單因素實驗，確定向海雁鵝血多肽的酶解工藝；通過響應(yīng)面法優(yōu)化向海雁鵝血多肽的最佳提取工藝；通過氨基酸分析儀對其氨基酸組成進行分析；采用Sephadex G-25 凝膠層析純化分離向海雁鵝多肽。結(jié)果表明：優(yōu)選出復(fù)合蛋白酶作為工具酶；最佳酶解工藝為超聲功率540 W，超聲波頻率20 KHz，加酶量4000 U/g，超聲時間4.5 h，此時水解度為28.77%；并測得其中含有17 種氨基酸，其中8 種為人體必需氨基酸；經(jīng)Sephadex G-25 凝膠層析純化得到向海雁鵝血多肽（XGP）。通過UPLC-Q-TOF-MS/MS 對XGP 成分組成進行分析；采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對向海雁鵝血多肽的活性分、潛在靶點和分子機制進行預(yù)測；包括藥物相似性評估、口服生物利用度預(yù)測、蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和分析、基因本體論(GO)術(shù)語和通路注釋；基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，構(gòu)建“成分-靶點-通路”的互作網(wǎng)絡(luò)；利用分子對接模擬方法進一步說明了配體的活性位點和結(jié)合程度，解釋了其可能的作用機制。結(jié)果表明分析其成分為H-Asn-Asp-Asp-Met-OH、Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr-Asp、Ala-Trp-Met-Asp-Phe-Val；網(wǎng)絡(luò)藥理篩選出相關(guān)靶點258 個，通過PPI 篩選得到46 個核心靶點，如AKT1、IL1B、SRC、STAT3、MMP9 和CCND1 等；GO功能富集分析64 個條目，主要調(diào)控肺癌反應(yīng)、蛋白質(zhì)磷酸化、氧化還原過程等生物功能，影響著細胞增殖、凋亡、氧化還原等；KEGG 分析富集到56 個信號通路，主要包括PI3K-ATK、RAS、Hepatitis B 等信號通路；XGP 通過多成分、多靶點和多通路協(xié)同作用于肺癌的網(wǎng)絡(luò)；向海雁鵝血多肽P1、P2、P3 與核心靶點AKT1、SRC、MMP9 具有良好的結(jié)合能力，證明向海雁鵝血多肽對肺癌具有潛在的抑制作用。采用CCK-8 法考察不同濃度的XGP 抑制人肺癌A549 細胞的增殖作用，考察不同濃度XGP 對細胞內(nèi)Ca2+釋放、細胞氧化損傷和ATP 的含量，使用XGP誘導(dǎo)人肺癌A549 細胞，采用qPCR 和Western blot 檢測細胞關(guān)鍵通路靶蛋白的表達水平。結(jié)果表明：XGP 呈濃度和時間依賴性地抑制人肺癌A549 細胞的增殖；XGP 可能通過人肺癌A549 細胞發(fā)生Ca2+超載，氧化損傷，抑制ATP 的合成和干擾能量代謝使細胞凋亡；qPCR 結(jié)果顯示XGP 可抑制核心靶點 AKT1 的表達水平；Western blot 結(jié)果顯示XGP 通過降低AKT1 的mRNA 表達水平，從而起到抑制人肺癌細胞A549 的作用，進一步驗證向海雁鵝血多肽對肺癌的抑制作用。向海雁鵝血多肽在抗肺癌方面具有廣闊的應(yīng)用前景，為未來向海雁鵝血的
開發(fā)應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。
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