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目的:通過建立大鼠頸部腎移植模型來探討前列地爾持續(xù)低溫灌對(duì)大鼠移植腎熱缺血的保護(hù)性作用及相關(guān)機(jī)制,為前列地爾應(yīng)用于臨床器官保存提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:選用近交系SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,均為雄鼠,體重均為250-300g。采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)(隨機(jī)數(shù)字表法)將80只供體SD大鼠均分為對(duì)照組(A組)、實(shí)驗(yàn)組(B組)2組,每組又分為術(shù)后1天、3天、5天和7天組等4個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測。兩組大鼠腎臟均熱缺血45min后持續(xù)4℃環(huán)境下灌注2h。灌注后,將供腎進(jìn)行頸部腎移植手術(shù)并摘除受體雙腎。對(duì)照組:灌注液為高滲枸櫞酸鹽腺嘌呤溶液(HC-A)腎保存液+生理鹽水;實(shí)驗(yàn)組:灌注液為高滲枸櫞酸鹽腺嘌呤溶液(HC-A)腎保存液+Lipo-PGE1。術(shù)后清潔級(jí)環(huán)境飼養(yǎng),于術(shù)后1天、3天、5天、7天采集頸靜脈血樣采用全自動(dòng)生化分析儀檢測血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatmne,SCr)含量,采血后處死并取腎臟組織。采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定腎臟組織8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy—2 deoxyguanosine,8-OHDG)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,免疫印跡法(western blotting,WB)檢測腎組織細(xì)胞凋亡標(biāo)志酶caspase-3和低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor-lalpha,HIF-1α)表達(dá)情況;腎組織HE染色后觀察病理形態(tài)學(xué)。得到數(shù)據(jù)后使用SPSS18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析。結(jié)果:1、腎功能兩組大鼠血清BUN濃度均呈上升趨勢,且兩組術(shù)后1、3、5天均進(jìn)行組內(nèi)對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),術(shù)后5、7天對(duì)比均無顯著差異(P>0.05);術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行組間比較,B組顯著低于A組(P<0.05)。兩組大鼠血清Cr濃度隨時(shí)間延長均呈顯著上升趨勢(P<0.05),均于術(shù)后7天達(dá)到高峰;兩組同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行組間比較,B組均顯著低于A組(P<0.05)。2、腎組織形態(tài)學(xué)改變A、B組光鏡觀察病理形態(tài)學(xué)上差異較顯著。A組腎小球體增大,腎小球毛細(xì)血管輪廓模糊,腎小囊腔變小,較多腎小管上皮水腫變性或壞死,胞漿內(nèi)紅染的顆粒數(shù)目明顯增多,且顆粒增粗,部分管腔內(nèi)可見管型。B組腎小球體稍增大,腎小球毛細(xì)血管輪廓較清晰,腎小囊腔減小不明顯,小部分腎小管上皮細(xì)胞水腫變性或壞死,胞漿內(nèi)紅染的顆粒數(shù)目有所增多,但顆粒未見增粗,少量管腔內(nèi)可見紅細(xì)胞管型,腎小管上皮細(xì)胞無破碎、壞死現(xiàn)象。3、腎組織8-OHDG和MDA的含量兩組8-OHDG含量在再灌注后隨著時(shí)間延長均呈逐步上升的趨勢;兩組術(shù)后同時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)比較,B組于術(shù)后各相鄰時(shí)間點(diǎn)的8-OHDG含量并無顯著性變化(P>0.05);而A組于術(shù)后第1天和第3天、第3天和第5天的8-OHDG含量變化顯著(P<0.05)。兩組于術(shù)后第1、3、5、7天進(jìn)行組間比較,B組的8-OHDG含量均較A組有顯著性下降(P<0.05)。兩組MDA含量在術(shù)后1、3、5天均呈逐步上升的趨勢,且均于術(shù)后第5天達(dá)到頂峰,隨后均有不同程度下降。B組的MDA含量在術(shù)后第1、3、5、7天均顯著低于A組(P<0.05);組內(nèi)比較,B組的MDA含量在術(shù)后第7天較第5天時(shí)顯著下降(P<0.05),而A組的MDA含量在術(shù)后第7天較第5天時(shí)比較無顯著性差異(P>0.05)。4、腎組織caspase-3與HIF-1α蛋白相對(duì)表達(dá)量兩組術(shù)后1、3、5、7天進(jìn)行組間比較,B組的caspase-3表達(dá)水平均顯著低于A組(P<0.05);A組的caspase-3表達(dá)水平術(shù)后呈逐漸上升的趨勢,并于術(shù)后第5天達(dá)到峰值,隨后第7天出現(xiàn)緩慢下降,術(shù)后1、3、5天進(jìn)行組內(nèi)比較均有顯著性差異(P<0.05),而第5天與第7天比較差異不明顯(P>0.05)。B組的caspase-3表達(dá)水平于術(shù)后第3天達(dá)到最高值,隨后第5、7天均顯著性下降(P<0.05)。兩組術(shù)后HIF-1α表達(dá)水平隨時(shí)間延長,均呈下降趨勢,但兩組術(shù)后1、3、5、7天進(jìn)行組間比較,B組的HIF-1α表達(dá)水平均顯著低于A組(P<0.05)。結(jié)論:1.含脂質(zhì)體前列地爾的HC-A腎保液可能是通過減輕氧自由基誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化損傷及DNA氧化損傷,減輕腎小管上皮細(xì)胞的損傷及壞死,來提高熱缺血腎臟保存質(zhì)量,從而改善大鼠移植腎功能。2.氧化應(yīng)激反應(yīng)及腎小管上皮細(xì)胞凋亡在大鼠移植腎缺血再灌注損傷機(jī)制中起著重要作用。

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